蛋白质由于暴露在胍中，而变性则主要用于免疫反应。材料准备本方案中的所有试剂均需要用DEPC处理的水。组织可以存储于－70°C数月而不影响RNA的产量或完整性。ii将约100mg的冷冻组织转移到含有液氮的研钵中，并用杵粉碎。iii通过离心收集细胞，弃去PBS,按每106个细胞加lmL单相裂解试剂比例加入单相裂解试剂。将上层水相转移到新的管中。DNA和蛋白质提取到有机相中，RNA留在水相中。加入0.5%SDS,然后加热至65℃可协助溶解沉淀。
dna及rna分子的提取?本方案(Chomczynski1993) 可以从部分组织或细胞中同时提取RNA 、DNA 和蛋白质像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一样，此方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞加入氯仿产生第二（有机）相，从而DNA 和蛋白质被抽提，而RNA留在水相上清中有机相中DNA 和蛋白质的分离，通过按顺序用乙醇、异丙醇进行沉淀从有机相中回收的DNA 是20kb 大小、适合进行PCR 反应的模板蛋白质由于暴露在胍中，而变性则主要用于免疫反应用异丙醇从水相中沉淀出的RNA 可通过色谱法在寡核苷酸-纤维素柱进一步纯化和/或用于Northern 杂交、反转录或RT-PCR ，接下来我们就来聊聊关于dna及rna分子的提取?以下内容大家不妨参考一二希望能帮到您!
dna及rna分子的提取
本方案(Chomczynski1993) 可以从部分组织或细胞中同时提取RNA 、DNA 和蛋白质。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一样，此方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞。加入氯仿产生第二（有机）相，从而DNA 和蛋白质被抽提，而RNA留在水相上清中。有机相中DNA 和蛋白质的分离，通过按顺序用乙醇、异丙醇进行沉淀。从有机相中回收的DNA 是20kb 大小、适合进行PCR 反应的模板。蛋白质由于暴露在胍中，而变性则主要用于免疫反应。用异丙醇从水相中沉淀出的RNA 可通过色谱法在寡核苷酸-纤维素柱进一步纯化和/或用于Northern 杂交、反转录或RT-PCR 。
总RNA 的产率因组织或细胞来源而异，但一般而言，组织的初始产量为4~7μg/mg ,细胞为5 ~ 10 mg/107 个细胞，所提取的RNA 的A260/A280 比值为1.8 ~ 2.0 。
材料准备本方案中的所有试剂均需要用DEPC 处理的水。
试剂
细胞或组织
氯仿
DEPC 处理过的水
十五水拧檬酸二钠( 0.8mol/U） 不需调整pH 。
乙醇（75%)
异丙醇
液氮
单相裂解试剂
氯化钠( 1.2 mol/L)
磷酸盐缓冲盐水(PBS) ，冰冷（可选，见步骤1)仅适用于重悬和单层细胞生长所需的。
RNA 沉淀溶液
SDS (20%, m/V) （可选，见步骤7 )
设备
用于测量在260nm 处吸光度的比色皿
组织匀浆器
低中速离心机和转子
DEPC 处理水清洗过的研钵和杵，预冷
聚丙烯带封盖的管
65°C 水浴（可选，见步骤7)
方法
- 准备细胞或组织样品提取RNA 。
对于组织样品
处理含有丰富的蛋白质分解酵素的组织如胰腺或肠道时，最好将组织先切成小块( 100mg ) ，然后直接放入液氮中。快速冷冻的组织可以被转移到－70°C 保存或立即用于提取RNA 。组织可以存储于－70°C 数月而不影响RNA的产量或完整性。
冷冻和粉碎并不是必需的。不含有丰富的RNase 的组织可以被迅速剁碎成小块，并直接转入加有适量溶液D （步骤l.iii ) 的聚丙烯snap-cap 管中。
i 分离出所需组织，并立即将它们放置在液氮中。
ii 将约100mg 的冷冻组织转移到含有液氮的研钵中，并用杵粉碎。在粉碎过程中添加液氮以保持组织的冷冻状态。
iii . 转移粉状组织至还有lmL 冰冷单相裂解试剂的聚丙烯snap-cap 管中。
iv 在室温下用Polytron 匀浆器匀浆组织15~30s 。
对于悬浮培养的哺乳动物细胞
i 通过200 ~ 1900g 离心5 ~ 10min 收获细胞。
ii 弃培养基，用1 ~ 2mL 的无菌冰冷PBS 重悬细胞沉淀。
iii 通过离心收集细胞，弃去PBS, 按每106 个细胞加lmL 单相裂解试剂比例加入单相裂解试剂。
iv 在室温下用Polytron 匀浆器匀浆组织15 ~ 30s 。
对于单层哺乳动物细胞
i 弃去培养基，并用5~10mL 无菌冰冷的PBS 漂洗细胞一次。
ii 弃去PBS, 按一个90mm 培养皿加入lmL 单相裂解试剂比例加入单相裂解试剂裂解细胞（每60mm 培养皿0.7mL) 。
iii. 细胞裂解液转移到聚丙烯snap-cap 管中。
iv . 在室温下用Polytron 匀浆器匀浆组织15 ~ 30s 。
2.在室温下孵育5min, 以完全分离核蛋白复合物。
3.每毫升单相裂解试剂添加0.2mL 氯仿。剧烈振动或涡旋以混合样品。
4.4°C 以12000r/min 离心15min, 分离成两相的混合物。将上层水相转移到新的管中。
DNA 和蛋白质提取到有机相中， RNA 留在水相中。DNA 和蛋白质可能通过顺序用乙醇、异丙醇沉淀，并从有机相中回收
5 . 从水相中沉淀的RNA : 对于每个初始毫升的单相裂解试剂，加入0.25 倍体积的异丙醇和0 .2 5 倍体积沉淀RNA 溶液。彻底混合后，室温下放置10min 。
6.微型离心机4 °C 以最大的速度离心10min 收集沉淀出的RNA 。用75％乙醇洗涤沉淀两次，再离心。用一次性吸头清除残留的乙醇。敞开放置数分钟使乙醇挥发，不要让沉淀完全干燥。
7.加入50~100mL DEPC 处理过的水， -70℃ 储存RNA 溶液。
加入0.5 % SDS, 然后加热至65℃ 可协助溶解沉淀。
8.估计RNA 的浓度。
